銳訊生物DropDx數(shù)字PCR儀助力數(shù)字PCR技術(shù)在NIPT領(lǐng)域的真正快速實施
10月中旬，《中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志》第41卷第10期，刊發(fā)了《數(shù)字PCR無創(chuàng)產(chǎn)前篩查技術(shù)應(yīng)用于胎兒染色體病篩查初步實施的專家共識》一文(https://rs.yiigle.com/cmaid/1517121,DOI:10.3760/cma.j.cn511374-20240318-00176）。共識詳細闡述了基于dPCR-NIPT的相關(guān)內(nèi)容，具體包括：基本要求、適用范圍、檢測前服務(wù)流程、檢測流程、報告解讀和遺傳咨詢以及技術(shù)的局限性等。
專家共識中發(fā)表的數(shù)字PCR設(shè)備配圖即為銳訊DropDx系列分體機原圖，詳情可查閱銳訊官網(wǎng)設(shè)備產(chǎn)品展示板塊（http://trip020.com）。
胎兒染色體非整倍體是產(chǎn)前篩查檢測的主要內(nèi)容，通過早期進行產(chǎn)前篩查和診斷，有利于促進優(yōu)生優(yōu)育。非整倍體產(chǎn)前檢測是采用無創(chuàng)、微創(chuàng)或有創(chuàng)的技術(shù)方法，在一定時間窗口期對孕婦進行檢查，以評估胎兒罹患染色體非整倍體疾病的風(fēng)險或進一步確診。傳統(tǒng)產(chǎn)前診斷方法具有侵入性，通過羊膜穿刺、絨毛取樣以及臍靜脈穿刺取樣進行染色體核型分析，有潛在的胎兒流產(chǎn)或感染風(fēng)險，早孕期、中孕期常規(guī)產(chǎn)前篩查通過超聲檢查聯(lián)合血清學(xué)標記分析，同時結(jié)合孕婦年齡、孕周、體重以及是否存在糖尿病等多項臨床信息，以軟件計算風(fēng)險值進行評估，但敏感度和特異性有限。1997年,Ｌo等在孕婦外周血中發(fā)現(xiàn)胎兒游離DNA（cellfree fetal DNA，cff DNA），為胎兒染色體非整倍體無創(chuàng)產(chǎn)前檢測（non invasive prenatal testing，NIPT）奠定了基礎(chǔ)。2008年，Ｌo等又驗證了基于孕婦血漿中的cff DNA和大規(guī)?；蚪M測序進行胎兒染色體非整倍體檢測的可行性。
現(xiàn)階段，基于NGS（高通量測序技術(shù)）的無創(chuàng)產(chǎn)前檢測已用于臨床篩查胎兒21三體、18三體，以及13三體綜合征，在高風(fēng)險孕婦中表現(xiàn)出很高的靈敏度、特異性以及檢出率。同時，NGS-NIPT（高通量測序無創(chuàng)產(chǎn)前檢測）會受到源于胎兒、母體、測序過程以及數(shù)據(jù)分析等多種因素的影響，可能出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果。另外，NGS-NIPT檢測成本昂貴，導(dǎo)致難以快速有效的大面積推廣。
隨著微流控技術(shù)的引入，代表第三代PCR技術(shù)的數(shù)字PCR（digital PCR，dPCR）表現(xiàn)出更高的檢測效率和靈敏度。已有研究表示，dPCR在染色體非整倍體無創(chuàng)產(chǎn)前檢測應(yīng)用中具有更直接、更快速和更具成本效益的發(fā)展?jié)摿Α?nbsp;同時還可以通過dPCR-NIPT技術(shù)和NGS-NIPT技術(shù)的聯(lián)合篩查，進一步提高胎兒染色體非整倍體是產(chǎn)前篩查檢測的準確性、安全性和及時性。
另外，共識相關(guān)推薦意見匯總?cè)缦拢?/span>
關(guān)于數(shù)字PCR無創(chuàng)產(chǎn)前篩查的技術(shù)難點
儀器：對儀器的性能要求嚴格。由于需要區(qū)分正常和非正常cff DNA拷貝數(shù)的微小差別（通常小于4%）用于無創(chuàng)產(chǎn)前篩查的數(shù)字PCR設(shè)備需要具有極佳的精密度和重復(fù)性。由于正常和非正常cff DNA的拷貝數(shù)差異在5%以內(nèi)，通過增加液滴數(shù)（即partition number）來實現(xiàn)加入的樣本的cfDNA的總量，從而實現(xiàn)擴大正常與非正常cff DNA拷貝數(shù)差異的目的，來提高檢測靈敏度。
在Dai [16]的研究中，計算了在特定條件下所需的最小液滴數(shù)。當 cffDNA 為 5% (0.05)，PDR 為 30% (0.3)時，需要約 18,000 個液滴或 PCR 反應(yīng)，才能以 95% （1.96 倍標準差）的置信度將一個非整倍體妊娠與一個整倍體妊娠區(qū)分開來。
試劑：用于無創(chuàng)產(chǎn)前篩查需要實現(xiàn)多重檢測，靶標越多檢測準確度越高。試劑的原理是通過檢測多重靶標，放大正常和非正常胎兒樣本的拷貝數(shù)差異。例如假設(shè)正常胎兒和非常胎兒拷貝數(shù)差1%，檢測一個靶標，100個拷貝的差異是1個拷貝。如果檢測10個靶標，差異將被放到到10個拷貝，將提高檢測的靈敏度。
在Lašáková的研究中[15]，作者分別使用了16對引物和兩個熒光標記的鎖核酸探針來對21號染色體和18號染色體進行檢測，這項測試在盲測中得到了驗證，研究對象是30名有唐氏綜合征21三體風(fēng)險的孕婦血漿樣本，風(fēng)險范圍從1:4到1:801。測試結(jié)果與侵入性診斷程序的結(jié)果完全一致（敏感性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值均為100%）。在Dai [16]的研究中,使用了10套引物探針對21,18和13號染色體進行多重檢測。在Tan[14]的研究中，使用了10ng的斷裂gDNA和不同數(shù)量的引物對（分別為1、5、10和20對，針對chr21和chr18）來驗證引物對數(shù)量與ddPCR檢測到的目標DNA分子數(shù)量之間的關(guān)系。結(jié)果顯示檢測到的DNA分子量高度依賴于引物對的數(shù)量，在給定一定量的DNA的情況下，增加引物對的數(shù)量能夠增加檢測到的目標DNA分子數(shù)量。
選擇靈敏度更高的數(shù)字PCR設(shè)備和精準設(shè)計驗證的多重數(shù)字PCR試劑，是提高dPCR-NIPT檢測靈敏度和特異性的關(guān)鍵所在。
- 關(guān)于銳訊生物
銳訊生物（Rainsure Scientific）是一家致力于精準診斷的創(chuàng)新型公司，秉承“創(chuàng)新、智造、助力健康”的宗旨，主要從事創(chuàng)新診斷平臺及IVD診斷解決方案的開發(fā)工作。公司憑借在微流控及智能制造領(lǐng)域的持續(xù)技術(shù)積累，已發(fā)展出包括微流控研究平臺、數(shù)字PCR系統(tǒng)及配套試劑盒等全球領(lǐng)先的科學(xué)儀器及分子診斷產(chǎn)品。公司創(chuàng)始團隊成員均畢業(yè)于常青藤盟校，曾就職于多家國際知名的生命科學(xué)廠商，具有豐富的行業(yè)經(jīng)驗和前沿視野。銳訊生物正致力于用創(chuàng)新技術(shù)，智能制造，賦能客戶，助力健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
近日，蘇州大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院感染科副主任，感染科ICU負責(zé)人，醫(yī)學(xué)博士，知名感染科專家黃小平主任做了感染快速識別快速評估的培訓(xùn)及講座。講座中介紹了黃主任實驗室自主開發(fā)的臨床常見微生物感染源快速診斷識別系統(tǒng)。其中包括床旁痰涂片快速染色成像系統(tǒng)，數(shù)字PCR超多重微生物檢測分子診斷平臺。銳訊生物DropX-2055數(shù)字PCR平臺及31重病原體檢測試劑盒助力其中。黃主任實驗室采用床旁痰涂片形態(tài)學(xué)診斷及數(shù)字PCR分子診斷平臺對ICU患者進行住院期間的動態(tài)監(jiān)測，針對患者的聲門下，氣道等多個部位的樣本采樣，在患者住院及治療期間采用動態(tài)監(jiān)測的手段，來評估治療過程中患者多個部位微生物感染病原體種類及拷貝數(shù)定量的變化過程，可用于呼吸機相關(guān)肺炎的提前預(yù)測、快速診斷和治療過程療效評估的判定。會議臨床醫(yī)生討論熱烈，針對不同患者的診斷結(jié)果，治療方案及療效做了深入的學(xué)術(shù)探討?？梢灶A(yù)見，未來新技術(shù)平臺將更多的應(yīng)用于臨床診斷當中，為醫(yī)者和患者帶來更多技術(shù)創(chuàng)新和更好的診療體驗。
近日在British Journal of Heamatology (影響印章6.5) 的期刊上有一篇由上海兒童醫(yī)學(xué)中心血液和腫瘤科發(fā)表的名為“Droplet digital PCR: An effective method for monitoring and prognostic evaluation of minimal residual disease in JMML”文章，該文章是關(guān)于使用液滴數(shù)字PCR（Droplet Digital PCR, ddPCR）技術(shù)監(jiān)測和評估幼年骨髓單核細胞白血?。?/span>Juvenile Myelomonocytic Leukemia, JMML）微小殘留?。?/span>Minimal Residual Disease, MRD）的回顧性研究。
JMML是一種罕見的骨髓增生性腫瘤，主要發(fā)生在兒童群體中。90%以上的JMML病例攜帶RAS通路基因突變，其中以PTPN11基因突變最為常見。JMML需要進行造血干細胞移植（HSCT）才能治愈。而大部分患者在造血干細胞移植后一年內(nèi)復(fù)發(fā)，中位復(fù)發(fā)時間為 2-4 個月。因此，動態(tài)監(jiān)測最MRD水平并及時干預(yù)可改善預(yù)后。由于 RAS 通路突變是 JMML 病例的發(fā)病機制、基于病理基因的分子 MRD 監(jiān)測可加強疾病復(fù)發(fā)的早期檢測，從而為早期干預(yù)提供機會，防止復(fù)發(fā)。
ddPCR是核酸定量技術(shù)中的佼佼者，其檢測限為 0.001%。除致病性體細胞 RAS 突變外，在以往的 JMML 研究中，它在檢測 SETBP1 和 JAK3 等罕見亞克隆突變方面已被證明優(yōu)于其他基因組學(xué)方法。此外，它的快速性和成本效益也使其成為常規(guī)臨床評估 JMML 疾病負擔的理想候選方法。在本研究中，作者利用 ddPCR 對一組接受 HSCT 后的 JMML 患者進行了回顧性動態(tài)監(jiān)測。ddPCR 不僅能有效檢測疾病復(fù)發(fā)，還有助于揭示 JMML 病程中的分子事件。
在這篇文章中，作者使用了銳訊生產(chǎn)的液滴數(shù)字 PCR 系統(tǒng)（RainSure Scientific 公司，中國蘇州）進行數(shù)字PCR檢測。啟動程序包括在 96°C 下保持 10 分鐘，然后在 96°C 下變性 2 分鐘，在 56°C 下退火/延伸 30 秒，循環(huán) 40 次?；蛴嫈?shù)分析系統(tǒng)（GeneCount Analysis System，RainSure Scientific，中國蘇州）建立了用于區(qū)分陰性和陽性區(qū)域的檢測參數(shù)，可對突變比率進行量化。
這是第一份使用 ddPCR 對造血干細胞移植后 JMML MRD 進行精確監(jiān)測的報告，為了解殘留白血病的動態(tài)變化提供了寶貴的信息。通過對 32 例造血干細胞移植后 JMML 患者的回顧性分析，ddPCR 能準確識別臨床復(fù)發(fā)，并比傳統(tǒng)方法更靈敏地檢測到白血病狀態(tài)的波動。以前的干預(yù)策略，如減少免疫抑制療法（IST）或供體淋巴細胞輸注（DLI），效果有限，這可能是由于嵌合體分析識別復(fù)發(fā)階段的時間較晚。
使用 ddPCR 進行監(jiān)測有助于檢測早期分子復(fù)發(fā)，從而在檢測到早期分子波動時及時實施干預(yù)措施并使用去甲基化藥物進行維持治療，這可能有助于預(yù)防未來的 JMML 復(fù)發(fā)。此外，ddPCR 還能在單次反應(yīng)中同時精確檢測供體 DNA 以進行嵌合體分析。ddPCR 的多方面監(jiān)測能力有助于更準確地顯示疾病狀態(tài)。
圖1. 監(jiān)測 JMML 患者 HSCT 后的疾病狀態(tài)。(A、B）散點圖說明了在不同隨訪時間點，通過 ddPCR 在 JMML 患者骨髓樣本中檢測到的典型 RAS 突變。圖中顯示了帶有標準偏差線的平均值。(C) 與傳統(tǒng)技術(shù)（STR-PCR、MFC 和血液形態(tài)學(xué)）相比，通過 ddPCR 評估復(fù)發(fā)動態(tài)。垂直虛線代表復(fù)發(fā)的臨床診斷，關(guān)鍵事件（DLI、IST、二次造血干細胞移植和死亡）沿水平時間軸標出。(D) 在六名非復(fù)發(fā)患者中觀察到的 ddPCR-MRD 水平波動，并與 STR-PCR 檢測結(jié)果進行比較與 STR-PCR 檢測結(jié)果的比較。BM，骨髓； DLI，供體淋巴細胞輸注； IST，免疫抑制療法；STR-PCR，短串聯(lián)重復(fù)聚合酶鏈反應(yīng)。
ddPCR 可以靈敏地檢測早期分子失效，這對預(yù)防 JMML 疾病進展至關(guān)重要。它使我們能夠首先在分子水平上理解 JMML 白血病負荷的動態(tài)變化，為了解疾病的本質(zhì)提供有價值的信息。它在 JMML 造血干細胞移植后的常規(guī)監(jiān)測和預(yù)后評估中起著至關(guān)重要的作用。作者建議至少在造血干細胞移植后的前 3 個月每月進行一次 BM MRD 評估。此外，根據(jù)造血干細胞移植后 1 個月的 ddPCR-MRD 水平確定高危患者，可以優(yōu)化 JMML 的管理。
近日，從國家知識產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)獲悉，銳訊生物科技有限公司申報的搭載我司數(shù)字PCR平臺應(yīng)用研發(fā)的微流控芯片組件專利《一種快速實現(xiàn)數(shù)字PCR反應(yīng)的微流控芯片組件及其應(yīng)用》正式獲得授權(quán)。就此，該專利實現(xiàn)了美國發(fā)明專利，歐洲發(fā)明專利和中國發(fā)明專利全部授權(quán)的成果，體現(xiàn)了銳訊生物一體式數(shù)字PCR 芯片設(shè)計的先進性和國際認可度，以為后期銳訊數(shù)字PCR平臺各類應(yīng)用方案全面推入市場起到了很好地支撐作用。
- 關(guān)于銳訊生物
銳訊生物（RainsureScientific）是一家致力于精準診斷的創(chuàng)新型公司，秉承“創(chuàng)新、智造、助力健康”的宗旨，主要從事創(chuàng)新診斷平臺及IVD診斷解決方案的開發(fā)工作。公司憑借在微流控及智能制造領(lǐng)域的持續(xù)技術(shù)積累，已發(fā)展出包括微流控研究平臺、數(shù)字PCR系統(tǒng)及配套試劑盒等全球領(lǐng)先的科學(xué)儀器及分子診斷產(chǎn)品。
銳訊生物正致力于用創(chuàng)新技術(shù)，智能制造，賦能客戶，助力健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展，公司堅持以創(chuàng)新為核心競爭力，目前銳訊已經(jīng)成功推出多款產(chǎn)品，包括：DropDx系列數(shù)字PCR系統(tǒng)、DropX系列數(shù)字PCR系統(tǒng)、100余種RUO檢測試劑盒、納米顆粒合成系統(tǒng)等。銳訊DropDx-2044型號的數(shù)字PCR系統(tǒng)產(chǎn)品已獲得NMPA，F(xiàn)DA-EUA，CE-IVD三大醫(yī)療認證，為行業(yè)唯一獲此殊榮的數(shù)字PCR系統(tǒng)。憑借高度自動化、一體化設(shè)計，極大節(jié)省人力成本，降低主觀操作失誤。同時開發(fā)平臺，兼容第三方qPCR試劑，檢測后的稀有樣本可以儲存，存疑結(jié)果可回溯。在國內(nèi)多家醫(yī)院，藥物企業(yè)和科研用戶中獲得廣泛好評。銳訊生物在產(chǎn)品開發(fā)的每一個環(huán)節(jié)都實行高標準的質(zhì)量控制，致力于為每一位客戶提供高品質(zhì)、高性能的產(chǎn)品。
銳訊進一步擴展海外市場，4月11日印度到訪銳訊生物桑田街研發(fā)及生產(chǎn)場地，重點學(xué)習(xí)和考察了銳訊生物數(shù)字PCR儀器產(chǎn)品，銳訊生物數(shù)字PCR高階多重?zé)晒饩幋a檢測技術(shù)及腫瘤液態(tài)活檢，微小病灶殘留，微生物感染數(shù)字PCR檢測試劑盒產(chǎn)品。后期雙方將進一步擴展數(shù)字PCR在印度市場的推廣。
目前銳訊生物海外銷售占比近7成，已經(jīng)在美國，歐洲，俄羅斯，東南亞地區(qū)實現(xiàn)銷售，并逐步穩(wěn)定建立了客戶群體。
近日，江蘇省科技廳公示2021年江蘇省重點研發(fā)計劃（社會發(fā)展）擬立項目，蘇州銳訊生物科技有限公司作為承擔單位的“一體化數(shù)字PCR系統(tǒng)的自主研發(fā)及配套試劑盒在新冠病毒檢測中的應(yīng)用”項目在列！
2021年度省重點研發(fā)計劃（社會發(fā)展）旨在重點支持人口健康、生態(tài)環(huán)境和公共安全等領(lǐng)域的重大共性關(guān)鍵技術(shù)研究和重大科技示范，培育民生科技相關(guān)產(chǎn)業(yè)，著力提升科技惠民的能力和水平，為加快建設(shè)高水平創(chuàng)新型省份提供有力支撐。
銳訊生物的數(shù)字PCR儀器是目前市面上唯一正式在售獲得NMPA、FDA-EUA和CE-IVD三大注冊證大滿貫的數(shù)字PCR產(chǎn)品。憑借一步法操作，達到顯著降低人工，同時兼具高靈敏，在國內(nèi)多家醫(yī)院，藥物企業(yè)和科研用戶中獲得廣泛好評。
2020年6月，銳訊生物開發(fā)的新冠病毒檢測試劑盒（數(shù)字PCR法）配合銳訊生物一體化數(shù)字PCR系統(tǒng)，獲得美國食藥監(jiān)局（FDA）應(yīng)急使用授權(quán)（EUA）。
目前，銳訊生物也已成功科研攻關(guān)出3款針對新冠變異株檢測的試劑盒產(chǎn)品，可鑒別英國變異株B.1.1.7、南非變異株B.1.351以及印度變異株B.1.617。
同時，銳訊生物也在積極配合國內(nèi)合作伙伴進行新冠檢測劑盒的驗證工作，經(jīng)過臨床驗證后，希望產(chǎn)品能夠繼續(xù)助力國內(nèi)新冠檢測包括變異株檢測，提供性能優(yōu)異的檢測產(chǎn)品。
>>>新址開業(yè)典禮
銳訊生物的數(shù)字PCR儀器是目前市面上唯一正式在售獲得NMPA、FDA-EUA和CE-IVD三大注冊證大滿貫的數(shù)字PCR產(chǎn)品。憑借一步法操作，達到顯著降低人工，同時兼具高靈敏，在國內(nèi)多家醫(yī)院，藥物企業(yè)和科研用戶中獲得廣泛好評。
>>>分子診斷學(xué)術(shù)研討會
銳訊生物已成功科研攻關(guān)出3款針對新冠變異株檢測的試劑盒產(chǎn)品，可鑒別英國變異株B.1.1.7、南非變異株B.1.351以及印度變異株B.1.617。產(chǎn)品已在奧地利，丹麥，捷克，西班牙，德國等多國使用，其準確性和特異性得到驗證。
據(jù)廣東省衛(wèi)健委通報，2021年6月8日0-24時，廣東省新增7例本土確診病例，均為廣州報告；另有本土無癥狀感染者轉(zhuǎn)確診病例1例，廣州報告。從5月21日發(fā)現(xiàn)首例感染者至今，廣州本輪疫情感染鏈已延長至127人。
廣州市副市長黎明在5月31日舉行的新聞發(fā)布會上曾介紹，本次廣州疫情的所有感染者病毒基因測序高度同源，所感染均為印度發(fā)現(xiàn)的變異毒株。
變異毒株的監(jiān)測與防護成為各方高度關(guān)注的問題，常見的變異株包括早先報道的英國變異株B.1.1.7, 南非變異株B.1.351, 巴西變異株P(guān)1以及5月10日被WHO列為“全球關(guān)切變異毒株”的印度變異株B.1.617。
銳訊生物集中研發(fā)力量，已成功科研攻關(guān)出3款針對新冠變異株檢測的試劑盒產(chǎn)品。包括新冠S基因檢測試劑盒（可一次反應(yīng)鑒別樣本是新冠普通型還是新冠變異株），新冠變異株3重鑒別檢測試劑盒（可同時檢測新冠英國變異株B.1.1.7和南非變異株B.1.351），以及針對印度變異株B.1.617的新冠印度變異株檢測試劑盒。
經(jīng)過歐洲客戶的嚴格的大量臨床樣本驗證，檢測結(jié)果和NGS測序結(jié)果比對，銳訊生物新冠變異株檢測試劑盒產(chǎn)品的準確性，特異性得到驗證。目前，銳訊變異株試劑盒已經(jīng)在奧地利，丹麥，捷克，西班牙，德國等多國使用。
同時,銳訊新冠免抽提檢測試劑盒憑借便捷操作, >98.5%的特異性(Specificity), >98.6%的靈敏度(Sensitivity),檢測下限(LoD)低至315拷貝/毫升的良好性能成功獲得印尼巴厘島航站樓新冠檢測項目。
目前，銳訊生物也在積極配合國內(nèi)合作伙伴進行變異株試劑盒的驗證工作，經(jīng)過臨床驗證后，希望產(chǎn)品能夠繼續(xù)助力國內(nèi)變異株檢測，提供性能優(yōu)異的檢測產(chǎn)品。
2021年4月16日-18日，由動脈網(wǎng)主辦，蘇州市吳江區(qū)人民政府、廣東省鐘南山醫(yī)學(xué)基金會聯(lián)合主辦，蘇州市吳江東方國有資本投資經(jīng)營有限公司協(xié)辦的“第五屆未來醫(yī)療100強”大會將以“生命的計算”為主題，在蘇州吳江盛大開幕。4月16日第五屆未來醫(yī)療100強大會頒獎晚宴上，銳訊生物榮獲未來醫(yī)療100強·澎橙獎·年度潛力企業(yè)獎。
本屆大會邀請了眾多政府、學(xué)者、投資人、企業(yè)家，聚焦3大主題峰會19場論壇，涵蓋10余個細分領(lǐng)域的深度洞察。群集國內(nèi)外最為活躍的醫(yī)療健康創(chuàng)新企業(yè)、上市公司、金融機構(gòu)、醫(yī)療機構(gòu)等，展示中國醫(yī)療健康領(lǐng)域的創(chuàng)新生態(tài)，共同打造一場產(chǎn)業(yè)生態(tài)融合的盛會。
數(shù)字PCR的“黑馬”即將跑出！
4月16日上午，銳訊生物副總經(jīng)理曹新偉先生在個性化診療論壇發(fā)表題為《產(chǎn)業(yè)聚焦后端，數(shù)字PCR的“黑馬”即將跑出！》的主題演講。
曹新偉在演講中提到：“新冠疫情快速催熟了中國分子診斷市場，熒光定量PCR技術(shù)的普及會加速分子診斷市場數(shù)字PCR診斷的升級。在微生物/病毒鑒定監(jiān)測，血液病MRD，靶向用藥伴隨診斷方面，數(shù)字PCR將發(fā)揮不可替代的作用。未來分子診斷市場，數(shù)字PCR技術(shù)將與NGS相輔相成，互為最重要的補充。”
